ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ КАК ГЕРОПРОТЕКТОРЫ: ГЕРОПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ «ТРАНСФЕР-ФАКТОРА»

ЭКОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА

ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ КАК ГЕРОПРОТЕКТОРЫ: ГЕРОПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ

«ТРАНСФЕР-ФАКТОРА»

В.И. Донцов22,,3,3 , В.Н. Крутько11,,3,3 , А.А. Кудашов44, В.А. Санталова⁵, А.Я. Чижов33,,5,5 , М.А. Ванюхина^1,3

¹¹¹ Институт системного анализа РАН

проспект 60-летия Октября, 9, Москва, Россия, 117312

²²² Московский государственный медико-стоматологический университет

ул. Делегатская, 20, стр. 1, Москва, Россия, 103473

³³ Национальный геронтологический центр

проспект 60-летия Октября, 9, Москва, Россия, 117312⁴⁴⁴

ООО «ВНИПИМ» 

пр. Ленина, 102, , Тула, Россия, 300026   

Экологический факультет

Российский университет дружбы народов

Подольское шоссе, 8/5, 113093, Москва, Россия

Биологически активная добавка «Трансфер-фактор», получаемая компанией «4 Life Research Co» (США) из коровьего молозива, положительно действует на иммунные показатели старых под- опытных мышей и оказывает комплексное геропрофилактическое влияние на их физическое состо- яние, динамометрические показатели, обмен веществ и свободнорадикальные механизмы старения.

«Трансфер-фактор» восстанавливает потенциал клеточного роста тканей старых животных до ве- личин, характерных для молодого возраста. Он может применяться для активации регенерации тканей с целью их заживления. Также важным является описываемый в работе антистрессорный эффект воздействия этого средства на иммунную систему и его защитное влияние на возрастное и алиментарное ожирение.

Ключевые слова: практическая геронтология, геростимулятор, геропрофилактический эффект, БАД «Трансфер-фактор», иммунная защита, предотвращение старости.

Введение. Одной из наиболее эффективных групп средств, обладающих ге- ропрофилактическими, реювенизирующими и биоактивирующими свойствами, являются иммуномодуляторы [1; 6; 12], эффект действия которых объясняют кор-

рекцией возрастного иммунодефицита. Однако, кроме классических представле- ний о стимуляции иммунитета иммуномодуляторами, обладающими геропрофи- лактическим эффектом, отечественными учеными разработаны представления о лимфоцитах как регуляторах роста и пролиферации собственно соматических клеток [2; 4—6].

Центральный механизм старения тканей, самообновляющихся путем кле- точного деления, связан со снижением клеточного самообновления (снижением потенциала клеточного роста), т.е. со снижением скорости физиологической ре- генерации. Возможность влияния на старение посредством влияния на процесс клеточного роста тканей связана с теорией регуляции процессов роста сомати- ческих тканей лимфоцитами, выдвинутой нашими учеными, которые впервые апробировали ее на моделях травматической регенерации ряда органов [2].

В нашей лаборатории проводится серия опытов по проверке иммунной тео- рии старения, связанной с наличием субпопуляций Т-лимфоцитов, специфически влияющих на клеточное деление соматических клеток и с истощением этой функции с возрастом, что имеет, возможно, регуляторный характер [4—6].

Данное предположение делает возможным использование различных имму- номодулирующих средств для омоложения тканей, а именно для восстановления потенциала клеточного роста тканей и их высокого уровня самообновления, уменьшающегося с возрастом. Перспективным для данной области исследований представляется использование новой биологически активной добавки, получа- емой из молозива коров — препарата «Трансфер-фактор» (ТФ), производимого компанией «4 Life Research Co».

Применение данной биологически активной добавки продемонстрировало выраженные иммуномодулирующие свойства при различных патологиях [3; 7; 8; 10; 11; 15], что, по мнению ряда ученых, позволяет рекомендовать данное средство в качестве профилактического препарата для предупреждения заболе- ваемости у здоровых людей [11; 13; 14; 15].

Возможность восстановления потенциала клеточного роста у старых мышей была показана в нашей лаборатории при применении «Трансфер-фактора» в тесте фармакологически индуцированной гиперплазии тканей [4—6]. Так как данную добавку получают из коровьего молозива (молока на первых неделях жизни), то ТФ естественным образом входит в группу реювенизирующих препаратов, ко- торые с древних времен добывали из молодых растительных и животных тканей, например проростков пшеничных зерен.

Целью данной работы было изучение комплексных эффектов «Трансфер- фактора» на процессы старения в эксперименте у старых мышей.

Материалы и методы. В эксперименте использовали 40 подопытных мы- шей-самок Balb/с питомника «Столбовая» в возрасте 8 месяцев, разделенных поровну на контрольную и опытную группы.

Опытной группе старых животных на протяжении трех месяцев вводили

«Трансфер-фактор» в физиологическом растворе. Доза соответствовала рекомен- дованной для человека из расчета на 1 кг веса (1 капсула 200 мг на 50 кг).

Для комплексной оценки старения животных использовали панель тестов, которые в предварительных экспериментах показали значительные различия для молодых и старых животных и в то же время малый межиндивидуальный разброс. Такие часто применяемые показатели [1; 16], как подвижность по числу пересе- ченных квадратов, число стоек (ориентировочный рефлекс), потребление кислоро- да, сорбция красителя тканью печени, гемолиз эритроцитов, каталаза и перокси- даза крови, окисленный глутатион оказались мало пригодными ввиду значитель- ных межиндивидуальных разбросов и относительно незначительных изменений с возрастом.

Параллельно для групп контрольных и опытных мышей исследовали сле- дующие показатели.

Общие физиологические показатели: общий вид по 6 показателям в баллах: цвет и лоск шерсти; наличие старческого горба; блеск глаз — по 4-балльной шка- ле (4 балла — норма у молодых); рост (с точностью 1 мм); вес тела (с точностью 0,1 г).

Физическая сила: время (сек) висения на струне, натянутой на высоте 80 см (в таблице результатов — строка «d»); максимальная сила натяжения динамо- метра (точность 0,1 г, в таблице результатов — строка «c»); индекс икроножной мышцы (ОВИМ, в таблице результатов — строка «h»).

Показатели общего обмена: уровень потребления кислорода — оказался весьма лабильным индивидуальным показателем, связанным с подвижностью животных; температура тела (строка «е») — отражает интенсивность общего обмена, и с возрастом у мышей она снижается на 1,5—2 °С и более. Температуру тела оценивали в прямой кишке медицинской термопарой, при введении на глу- бину 1 см (точность 0,1 °С).

Морфологические показатели: масса внутренних органов (как абсолютная, так и относительная — к массе тела): тимуса (строка «i»), селезенки (строка

«j»), почек (строка «k»), сердца (строка «l») и печени (строка «m»). Данные по- казатели использовались для оценки возрастной атрофии тканей.

Состояние антиоксидантной системы: оценивалось общее содержание продуктов свободнорадикального повреждения — ТБК-активных веществ, реа- гирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), результат выражался в единицах оптической плотности (строка «n»). Для этого 0,1 мл осажденных в процессе центрифугирования эритроцитов лизировали добавлением 1 мл дистиллирован- ной воды, прибавляли 0,5 мл 17% трихлоруксусной кислоты для осаждения бел- ка эритроцитов и кипятили 10 мин на кипящей бане; затем 10 мин центрифуги- ровали при 3000 об/мин и замеряли оптическую плотность при длине волны 540 нм на спектрофотометре СФ-46.

Состояние иммунной системы: исследовали с помощью упомянутых выше морфологических показателей — относительной массы органов иммунитета (ти- муса и селезенки); также определяли: количество активных — бластных клеток (строка «g») в селезенке, не осаждающихся при центрифугировании в градиенте плотности фиколла 1,065; количество циркулирующих иммунных комплексов

(ЦИК) сыворотки крови (строка «o») методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000) с нефелометрической регистрацией степени помутнения на спектро- фотометре, результаты выражались в условных единицах, равных оптической плотности. Для определения ЦИК к 0,05 мл сыворотки крови подопытных мышей добавляли 0,1 мл 0,1 молярного боратного буферного раствора с рН 8,4 и 1 мл ПЭГ, через 1 час при 20 °C замеряли оптическую плотность при 450 нм.

Потенциал клеточного роста: оценивали на примере реакции Селье — фар- макологически индуцированной гиперплазии слюнных желез при введении изо- протеренола (строка «f»); реакция резко снижается с возрастом и зависит от опре- деленных популяций Т-лимфоцитов, регулирующих клеточный рост соматических клеток [4—6].

Результаты лабораторных исследований были обработаны статистическими методами с вычислением: среднего значения (М), среднеквадратичного отклоне- ния (m), максимального и минимального значений, с вычислением коэффициента Стьюдента для сравнения значений у молодых и старых животных и определени- ем уровня достоверности (р).

Результаты исследования и их обсуждение. Основные результаты иссле- дования сведены в таблицу. 

Результаты исследований морфофизиологических показателей

Оценка общего вида животных по цвету и лоску шерсти, наличию старче- ского горба и блеску глаз в баллах недостаточно информативна, поскольку старые животные заметно не отличались по данным показателям от молодых трех- — четырехмесячных. Резкие изменения показателей внешнего облика были замече- ны лишь в гораздо более поздних возрастах при условии кормления животных преимущественно гранулированным кормом. Рацион, применяемый в наших ла- бораторных испытаниях (овощи, молоко, крупы, неограниченный объем пищи), обусловил отсутствие резких внешних возрастных изменений.

Рост грызунов продолжается в течение всей жизни, однако со временем он резко замедляется. Нами не было отмечено различий в средних показателях роста в контроле и опыте.

Масса опытных мышей статистически не отличалась от контроля, однако в наших условиях, когда животные получали неограниченное и разнообразное питание, в контроле они четко разделялись на две группы: с массой тела 24—27 г и 33—40 г, с явными признаками ожирения во втором случае. В то же время в группе опытных животных масса тела мышей не выходила за пределы 24—27 г. Таким образом, ТФ явно влиял на жировой обмен животных, предотвращая воз- растное ожирение. Отмечалось также снижение потребления корма животными, получавшими «Трансфер-фактор», что свидетельствует о влиянии этой биодо- бавки на процесс алиментарного ожирения.

Общий обмен веществ у подопытных грызунов, оцениваемый в наших испы- таниях по температуре тела, имел в среднем более высокие значения, но межин- дивидуальные вариации были высоки, как мы полагаем, по причине того, что тем- пература у самок может значительно зависеть от эстрального цикла, а также в си- лу разновременного вхождения в климактерический период.

Сила опытных животных, оцениваемая по показателям динамометрии и вре- мени висения на струне, статистически значимо возрастала, что сопровождалось и статистически достоверным увеличением индекса икроножной мышцы (ОВИМ). У старых грызунов из опытной группы было замечено увеличение относи- тельной массы внутренних органов, особенно иммунокомпетентных — тимуса и селезенки. Количество активных клеток селезенки, оцениваемых по центрифу- гированию в градиенте плотности фиколла с пониженной плотностью, также зна- чимо увеличивалось. Количество иммунных комплексов, с другой стороны, значи- мо снижалось. Хорошо известно, что с возрастом уровень иммунных комплексов

у мышей значимо повышается, что отражает развитие аутоиммунных процессов. При старении у грызунов, как правило, развивается естественный иммуно-

дефицит, выражающийся, в частности, в резком снижении относительной мас- сы иммунокомпетентных органов — тимуса и селезенки. Одновременно резко снижаются процессы клеточного деления самообновляющихся тканей, а также скорость и объем гиперпластических реакций при воздействиях разного харак- тера. Удобно для оценки уровня ростового потенциала ткани использовать из- вестный феномен Селье — фармакологически индуцированную реакцию гипер- плазии ткани слюнных желез. С возрастом данная реакция резко снижается. Из-

вестно также, что это является результатом снижения активности лимфоидных клеток — регуляторов процессов роста соматических тканей: в ходе гиперпла- стических и регенеративных реакций самого разного типа происходит активи- рование регулирующих этот процесс лимфоидных клеток, которые скорее всего являются лимфоцитами, реагирующими в сингенной смешанной культуре лим- фоцитов [4—6]. Так как типичным для активации лимфоцитов — регуляторов клеточного роста соматических тканей является их бластная активация, их мож- но выделить в градиенте фиколла с пониженной плотностью [4—6].

Нами было показано, что введение изопротеренола приводит к гиперплазии слюнных желез молодых мышей (повышение массы в 1,56—1,72 раза), тогда как все старые животные продемонстрировали уменьшение реакции — снижение мас- сы желез ниже интактных.

Введение «Трансфер-фактора» восстанавливало потенциал клеточного роста у старых мышей для всех животных — введение изопротеренола увеличивало массу слюнных желез для старых животных в 1,4—1,6 раз, приближая степень гиперпластической реакции к значению, характерному для молодых мышей. Также резко (в 2—3,5 раза) увеличилось количество активированных клеток селезенки, имеющих более низкую плотность при центрифугировании в градиенте плотно- сти фиколла.

Нами также было зафиксировано снижение стрессовой реакции тимуса на введение адренергического агента — изопротеренола. Как известно, типич- ная реакция на стресс — это резкое и быстрое уменьшение массы тимуса, что было отмечено в контрольной группе животных. При этом у группы животных, получавших «Трансфер-фактор», значимого снижения массы тимуса на стрес- сорный агент не наблюдалось.

Одним из главных результатов наших испытаний стало снижение количест- ва ТБК-активных веществ в крови у животных, получавших «Трансфер-фактор». Это говорит о благоприятном воздействие биологически активной добавки «Транс- фер-фактор» на возрастные процессы накопления в тканях продуктов перекисного окисления, что в соответствии со свободно-радикальной теорией старения счита- ется одним из главных механизмов старения у млекопитающих [1; 9].

Заключение. Таким образом, применение «Трансфер-фактора» у подопыт- ных старых мышей продемонстрировало как положительное влияние на иммун- ные показатели старых животных, так и комплексное геропрофилактическое дей- ствие у мышей при длительном введении данной добавки, повлияв на физическое состояние, силу животных, обмен веществ, свободно-радикальные механизмы старения и клеточный потенциал роста тканей старых животных, восстановлен- ный до уровней, близких к молодому возрасту. Открытые нами эффекты воздей- ствия «Трансфер-фактора» открывают возможности перспективного применения данного препарата в области практической геронтологии. В медицине антистаре- ния эта биологически активная добавка имеет потенциал применения для актива- ции клеточного роста, для профилактики различных патологических процессов

и стимуляции посттравматической регенерации тканей. Не менее интересным и перспективным эффектом можно считать анти-стрессорное действие данного препарата на иммунную систему и его протективное действие на возрастное и алиментарное ожирение.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. — СПб.: Нау- ка, 2003.
2. Бабаева А.Г. Прошлое, настоящее и будущее проблемы лимфоидной регуляции нелим- фоидных клеток // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1995. —

№ 9. — С. 230—234.

3. Дадали В.А., Рак А.В., Столпник Е.С., Келвин В.К. Мак-Косланд, Оганова Э.А. При- менение «Трансфер-фактора» в лечении больных остеомиелитом // Вестник Санкт-Пе- тербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. — 2002. —

№ 3—4.

4. Донцов В.И. Регуляция лимфоцитами клеточной пролиферации — альтернатива тео- рии «противоопухолевого надзора?» // Иммунология. — 1989. — № 5. — С. 94—96.
5. Донцов В.И. Иммунобиология постнатального развития. — М.: Наука, 1990.
6. Донцов В.И., Крутько В.Н., Подколзин А.А. Фундаментальные механизмы геропрофи- лактики. — М.: Биоинформсервис, 2002.
7. Иммунореабилитация при инфекционно-воспалительных и соматических заболеваниях с использованием трансфер-факторов: Методическое письмо Минздрава России. — 2004.
8. Карбышева Н.В., Карбышев И.А., Татаринцев П.Б., К. Мак-Косланд, Оганова Э.А.

«Трансфер-факторы» в лечении больных вирусными гепатитами // Сибирский журнал

«Гастроэнтерология и гепатология». — 2003. — № 16. — С. 147—149.

9. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк // Успехи геронтологии. — 2000. — Вып. 4. — С. 33—40.
10. Лыкова С.Г., Немчанинова О.Б., Черникова Е.В., Гичев Ю.П. Опыт применения

«Трансфер-фактора» в дерматовенерологии // Сибирский журнал дерматологии и ве- нерологии. — 2002. — № 3. — С. 34—35.

11. Оганова Э.А., Келвин В., К. Мак-Косланд. «Трансфер-факторы» — природные имму- нокорректоры // Сб. науч.-практ конф. с международным участием: Иммунореабили- тация при инфекционно-воспалительных заболеваниях. — Барнаул. 29 ноября 2003. — С. 22—26.
12. Семенков В.Ф., Карандашов В.И., Ковальчук Л.В. Иммуногеронтология. — М.: Меди- цина, 2005.
13. Суханов Б.П. «Трансфер-факторы» как элемент питания человека // Сб. науч.-практ. конф. с международным участием: Иммунореабилитация при инфекционно-воспали- тельных заболеваниях. — г. Барнаул. 29 ноября 2003. — С. 27—28.
14. Хеннен У.Дж. Трансфер-фактор Плюс: идеальная комбинация биологически активных веществ для оптимального иммунитета / Под ред. Ю.П. Гичева и Э.А. Огановой. — Новосибирск, 2001.
15. Lawrence H.S., Borkowsky W. «Transfer Factor current, status and future prospects» // Biothe- rapy. — 1996. — Vol. 9. — P. 1—3.
16. Warner H.R., Ingram D., Miller R.A., Nadon N.L., Richardson A.G. Program for testing bio- logical interventions to promote healthy aging // Mech. Ageing Dev. — 2000. — Vol. 115. — P. 199—208.